胞外HMGB1在ALD-DNA誘導巨噬細胞活化中的作用及其機制

胞外HMGB1在ALD-DNA誘導巨噬細胞活化中的作用及其機制

作者:師大云端圖書館 時間:2018-03-06 分類:參考文獻 喜歡:2450
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【摘要】目的:系統性紅斑狼瘡(systemiclupuserythematosus,SLE)是一種典型的自身免疫性疾病,其病變特征包括患者血清中出現高水平的針對自身核抗原產生的自身抗體。目前SLE的發病機制仍未完全明確,與多種因素有關。正常情況下,哺乳動物DNA等核成分的免疫原性很弱,難以誘導自身抗體產生,因而闡明自身DNA如何打破免疫耐受激活免疫系統是研究SLE發病機制的重點。我們實驗室前期研究發現與正常淋巴細胞來源的DNA(UnALD-DNA)相比,用ConA活化的淋巴細胞來源的DNA(ALD-DNA)免疫同系BALB/c小鼠可以誘導抗dsDNA抗體的產生,高水平尿蛋白等SLE樣綜合征的發生;進一步研究發現:ALD-DNA可以有效活化免疫細胞,尤其是巨噬細胞,分泌大量炎性細胞因子,其中巨噬細胞是參與天然免疫的重要細胞,同時也是一類專職APC,在天然免疫應答和適應性免疫應答過程中均發揮著重要作用。但是ALD-DNA是如何被巨噬細胞識別,進而活化巨噬細胞的,其具體機制還有待進一步研究。高遷移率族蛋白B1(highmobilitygroupproteinB1,HMGB1)是高遷移率族蛋白(HMG)家族成員之一,因在聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)中遷移率高而得名。它廣泛存在于真核細胞內,能夠調節基因轉錄、穩定核小體的結構以及釋放后具有炎癥介質功能的核蛋白,是一種重要的與損傷相關的分子識別模式(damageassociatedmolecularpatterns,DAMPs)。靜息條件下,HMGB1存在于細胞核內,當機體受到一定刺激時,核內的HMGB1可通過活化的免疫細胞如巨噬細胞或單核細胞的主動分泌和壞死細胞的被動釋放轉移至細胞外。研究發現,HMGB1能夠結合多種核酸成分,進而活化下游特異性核酸受體,誘導巨噬細胞分泌大量炎性因子,在機體免疫系統對核酸成分應答的過程中可能扮演著重要角色。近年來有研究顯示HMGB1可以激活和趨化炎癥細胞,誘導大量細胞因子的分泌,被認為是一種新型的炎性介質,正引起國內外學者的廣泛關注。前期我們實驗室研究發現HMGB1在ALD-DNA誘導巨噬細胞活化中扮演定的角色,但是HMGB1是如何增強巨噬細胞對ALD-DNA的識別,加重炎癥反應,并且胞漿還是分泌到胞外的HMGB1對ALD-DNA識別、攝取及細胞內的運輸等影響是怎樣的尚不清楚。在本研究中,我們重點探討了胞外還是胞內的HMGB1在ALD-DNA誘導巨噬細胞活化中的作用機制,即HMGB1介導ALD-DNA刺激巨噬細胞活化的形式、位置及其機制。這一研究不僅有助于我們更好地解釋HMGB1促進ALD-DNA誘導巨噬細胞活化的機制,而且為闡明SLE的發病機理提供了更堅實的理論依據,有利于為SLE的防治策略尋找到新的靶點。方法:首先用ALD-DNA刺激RAW264.7巨噬細胞系后,用Westernblot和ELISA的方法檢測細胞以及上清中HMGB1的表達情況。含有HMGB1-shRNA的慢病毒載體經293T細胞包裝病毒后,感染RAW264.7,Real-time和Westernblot評估HMGB1下調效率。ALD-DNA刺激上述HMGB1穩定下調的巨噬細胞(HMGB1KDRAW264.7)及正常RAW264.7,流式細胞術檢測細胞表面協同刺激分子表達水平,Real-time檢測細胞內IL-6,IL-10,TNF-amRNA表達情況,以評估HMGB1在ALD-DNA誘導巨噬細胞活化中的作用。用丙酮酸乙酯抑制HMGB1分泌出細胞外,HMGB1拮抗劑A盒肽和HMGB1特異性中和抗體等處理細胞后,ELISA和Real-time的方法檢測炎性細胞因子的表達情況,同時我們給予正常RAW264.7和HMGB1KDRAW264.7細胞外源HMGB1蛋白時,檢測了炎性細胞因子的表達情況,以評估胞外HMGB1在ALD-DNA刺激巨噬細胞活化中的作用。最后我們探討了HMGB1介導ALD-DNA誘導巨噬細胞活化的機制,首先用間接競爭性ELISA的方法HMGB1與ALD-DNA或UnALD-DNA的相互作用及結合親和力的差異;隨后通過流式細胞術檢測了HMGB1對巨噬細胞吞噬ALD-DNA或UnALD-DNA的影響;最后用激光共聚焦熒光顯微鏡觀測了HMGB1對ALD-DNA或UnALD-DNA進入細胞后囊泡運輸間的影響。結果:ALD-DNA可以有效刺激巨噬細胞活化,HMGB1分泌顯著增加,并且呈現時間劑量依賴性;HMGB1-shRNA特異性下調HMGB1效果明顯,下調效率達到1/5,可以用于后續實驗;當巨噬細胞中HMGB1下調后,其分泌HMGB1的能力減弱,同時ALD-DNA誘導巨噬細胞表面協同刺激分子、MHC-Ⅱ類分子表達下降,炎性細胞因子mRNA表達顯著減少,巨噬細胞活化程度降低。丙酮酸乙酯阻止巨噬細胞受ALD-DNA刺激后HMGB1的分泌,HMGB1在胞質中大量積累,細胞上清中炎性細胞因子的含量顯著減少;HMGB1拮抗劑A盒肽和HMGB1特異性中和抗體處理細胞后,發現ALD-DNA刺激巨噬細胞分泌的炎性細胞因子含量也顯著降低;同時給予正常RAW264.7以及HMGB1KDRAW264.7外源HMGB1蛋白時發現HMGB1-可以增強ALD-DNA刺激正常RAW264.7分泌更多的炎性細胞因子,并且ALD-DNA刺激HMGB1KDRAW264.7分泌炎性細胞因子的能力在加入外源HMGB1后得到一定程度的恢復。競爭性間接ELISA的結果表明HMGB1可以與ALD-DNA和UnALD-DNA結合,但是與ALD-DNA的結合親和力顯著高于UnALD-DNA;HMGB1對巨噬細胞攝取不同DNA沒有顯著影響;激光共聚焦的結果顯示HMGB1可以顯著增加ALD-DNA在內體上的定位,并且加速了ALD-DNA在內體上的募集。結論:ALD-DNA可以有效刺激巨噬細胞分泌HMGB1,并且這一過程具有時間劑量依賴性。HMGB1在ALD-DNA誘導巨噬細胞活化中具有重要作用,且胞外HMGB1在其中扮演關鍵角色。HMGB1可以有效與ALD-DNA結合,加速和增加了其在巨噬細胞內早期內體上的募集,從而促進了ALD-DNA誘導巨噬細胞活化,介導SLE的病理發展。該研究進一步闡明HMGB1介導ALD-DNA誘導巨噬細胞活化介導SLE發生的可能機制,對于深入理解SLE的發病機理和SLE臨床治療新策略都具有重要意義。
【作者】李小云;
【導師】熊思東;
【作者基本信息】蘇州大學,免疫學,2014,碩士
【關鍵詞】胞外HMGB1;活化淋巴細胞來源DNA;巨噬細胞活化;

【參考文獻】
[1]李淑萍.高強度鋼板熱沖壓模具冷卻系統優化數值分析研究[J].中國校外教育.
[2]高鳴.人羊膜修復腱鞘缺損的實驗研究[D].河北醫科大學,外科學,2013,碩士.
[3]趙亮杰.一種Buck_Boost開關電源電路的設計與仿真[D].揚州大學,微電子學與固體電子學,2012,碩士.
[4]康然.我國現階段個人收入分配問題研究[D].西安科技大學,馬克思主義理論,2013,碩士.
[5]李小強.動脈粥樣硬化的新調控基因-JAZF1和KLF14[D].重慶醫科大學,臨床檢驗診斷學,2014,博士.
[6]徐鵬.石油烴代謝菌分泌綠膿菌素對其降解過程的影響作用研究[D].西安建筑科技大學,環境科學,2013,碩士.
[7]邢冬.連續性腎臟替代治療對合并急性腎損傷重癥感染患者亞胺培南血藥濃度的影響[D].河北醫科大學,急診醫學,2014,碩士.
[8]沈媛媛.我國缺陷產品召回法律制度研究[D].首都經濟貿易大學,經濟法,2013,碩士.
[9]王學文.經皮椎體成形術的實驗研究[D].重慶醫科大學,外科學,2004,碩士.
[10]李新喜,袁曉嬌,張國慶,張磊.鋰離子電池硅/石墨復合負極材料的制備及性能研究[J].廣東工業大學學報,2014,02:27-31.
[11]吳京津.2010-2012年全國少兒游泳比賽犯規現象的研究與分析[D].首都體育學院,運動訓練,2013,碩士.
[12]邱建雄.建筑工程項目目標管理探析[D].重慶大學,建筑與土木工程,2003,碩士.
[13]徐斌.電化學預處理玉米秸稈的研究[D].中國地質大學(北京),環境科學與工程,2014,碩士.
[14]鄭潔.ZigBee技術在遠程路燈監控系統的應用研究[D].杭州電子科技大學,電路與系統,2013,碩士.
[15]陳瑩.中學生英語學習焦慮研究[D].山西財經大學,外國語言學及應用語言學,2013,碩士.
[16]李莉.高檔飯店品牌資產、品牌關系對顧客重購行為的影響研究[D].浙江大學,2006.
[17]劉麗芳.耦合量子阱結構中局域自旋極化密度振蕩[D].內蒙古大學,物理學,2014,碩士.
[18]郝曉靜.越南海洋意識若干因素分析[J].中國國情國力,2014,02:67-69.
[19]王胡紅.投入學習理論在高中信息技術課堂教學中的應用研究[D].華中師范大學,現代教育技術,2013,碩士.
[20]王連錚.變頻調速系統的傳遞函數分析和設計方法[J].冶金自動化,1988,06:28-31+22.
[21]趙燕偉,李文,張景玲,任設東.多車型同時取送貨問題的低碳路徑研究[J].浙江工業大學學報,2015,01:18-23.
[22]傅冬.A公司精益生產管理應用研究[D].山東大學,工商管理(專業學位),2013,碩士.
[23]高德柱,梁琪,王濤,楊冰.鞍鋼線材廠吐絲機的故障診斷[J].冶金自動化,2008,05:29-33.
[24]李茂.IL-23在大鼠脊髓損傷中的表達[D].蚌埠醫學院,人體解剖與組織胚胎學,2013,碩士.
[25]葉幸歡.ABC海運集團中東航線客戶關系管理研究[D].蘭州大學,工商管理(專業學位),2012,碩士.
[26]李小青,陳國柱.基于3次諧波無源注入法的諧波抑制技術[J].電力系統自動化,2007,14:61-65.
[27]劉穎.區域教師虛擬實踐共同體支持平臺研究[D].西南大學,教育技術學,2013,碩士.
[28]李明澤,王斌,范文義,趙丹丹.東北林區凈初級生產力及大興安嶺地區林火干擾影響的模擬研究[J].植物生態學報,2015,04:322-332.
[29]馮志新.基于FP-樹的最大頻繁模式挖掘算法研究[D].廣西大學,2003.
[30]徐金柱.羅蘭·巴爾特中性思想探究[D].復旦大學,文藝學,2012,碩士.
[31]王冬星,朱建秋,楊引霞.一種指數平滑預測的參數優化方法及實現[J].微機發展,2005,03:1-3+41.
[32]王丹.泰國高校漢語相關專業招生考試試題分析[D].西安外國語大學,漢語國際教育,2014,碩士.
[33]董瑾.互聯網時代網絡輿論監督問題研究[D].寧夏大學,馬克思主義基本原理,2014,碩士.
[34]饒元,馮博琴.數據倉庫的存儲優化設計[J].計算機工程與應用,2003,36:197-200.
[35]張連重.基于機器人堆焊的快速再制造成形分層路徑規劃研究[D].新疆大學,機械工程,2013,碩士.
[36]劉陽.木質纖維素原料體系中乳酸菌抗逆性和半纖維素降解酶的研究[D].華東理工大學,生物化工,2014,碩士.
[37]倪蘭春.腦膜瘤中組織蛋白酶的異常表達及其臨床價值[D].蘇州大學,神經外科,2003,碩士.
[38]李靜.CRH2型動車組輪對檢修限度及檢修工藝過程研究[D].北京交通大學,2014.
[39]劉笑天.基于昂譜模式的舟山群島新區海島旅游產品開發[D].浙江海洋學院,農村與區域發展(專業學位),2014,碩士.
[40]彭和平.設置抗拔型三重摩擦擺隔震支座的框架結構抗震性能研究[D].蘭州理工大學,建筑與土木工程,2013,碩士.
[41]姚翔.GPU并行技術在改進遺傳算法及分子相似性中的應用[D].大連理工大學,工程力學,2013,碩士.
[42]蘇韋銓.統一后德國環境外交政策[D].云南師范大學,世界史,2013,碩士.
[43]任春林.用戶推動認證是提高電子元器件質量的有效途徑[J].電子質量.2000(04)
[44]高琳.我國民事執行聽證制度研究[D].海南大學,訴訟法學,2014,碩士.
[45]施繼承,聶勛碧.基于神經網絡的油氣預測系統[J].石油地球物理勘探,1996,05:685-692+750.
[46]金書鑫.停車產業化環境下社會公共停車場建設效益評估[D].長安大學,交通運輸規劃與管理,2014,碩士.
[47]丁浩,李電生.城市物流配送中心選址方法的研究[J].華中科技大學學報(城市科學版),2004,01:50-51+54.
[48]楊蕾.基于灰色信息的“兩化”融合成熟度評價研究[D].南京航空航天大學,管理科學與工程,2013,碩士.
[49]曲國輝.強堿三元復合驅后巖心物性檢測及微觀剩余油研究[D].東北石油大學,油氣田開發工程,2012,碩士.
[50]劉紅霞.家庭因素對大學生職業選擇影響的質性研究[D].華中科技大學,發展與教育心理學,2012,碩士.

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